محیط کشت EMB Levine

EMB Agar Levine (Eosin Methylene Blue Agar)

ME – 1501

اين محيط توسط (Levine) براي جدا سازي و شناسائي وافتراق       باكتريهاي        بيماريزاي گروه Enterobacteriaceaeپيشنهاد شده است.

مواد تشكيل دهنده (گرم در ليتر):

Peptone ………………………………….….…….10

Lactose….…………………………………………10

Dipotassium phosphate……..……………….2

Eosin y…………………….…………………….…0.4

Methylene blue…………………….……….0.065

Agar……………………………..……………………16

pH : 7.2 ± 0.2 (at 25°C)

دستورالعمل :

46/38 گرم از پودر را به 1 ليتر آب مقطر يا ديونيزه اضافه نمائيد و آنرا بجوشانيد  تا كاملا حل گـردد. سپس ‍آنرا در دماي   ° C121 و فشار 15 پوند به مدت 15 دقيقه اتوكلاو نمائيد.دماي محيط را به ° C60  برسانيد و محيط را بخوبي تكان دهيد تا متيلن بلو اكسيد شود. .

ائوزين متيلن بلو آگار لیوین

يك محيط انتخابي – افتراقي است كه  براي جداسازي باكتريهاي گرم منفي روده اي بكار ميرود.ائوزین Yومتیلن بلو محیط را انتخابی واز باکتری های گرم مثبت ممانعت می کند.این رنگ باعث افتراق بین باکتری های تخمیر کننده لاکتوز و لاکتوز منفی ها می شود.در این محیط کلنی باکتری های تخمیر کننده لاکتوز (E.coli) تیره با جلای فلزی و کلنی باکتری های لاکتوز منفی )سالمونلا و شیگلا ) شفاف و بی رنگ است.در کلیفرم ها تولید رنگ ارغوانی تیره ناشی از کمپلکس رنگ متیلن بلو-ایئوزین Yمی باشد وقتی  pHافت می کند( به دلیل تخمیر لاکتوز) که کمپلکس رنگ در کلنی جذب می شود و در لاکتوز منفی ها pH بالا در محیط که بوسیله تجزیه پروتئین ها ایجاد می شود کمپلکس رنگ متیلن بلو-ائوزینYرا حل می کند و کلنی بی رنگ ایجاد می شود.  جهت انكوبه كردن ؛ محيط كشت داده شده را به مدت 24  ســـــــاعت در دماي C °  37 قرار دهيد.

شرايط نگهداري:

در جاي خشك و دور از نور مستقيم و در حرارت C °15 تا C °25 نگهداري نمائيد. پس از استفاده درپوش را محكم ببنديد. محيط آماده را در دماي C ° 8-2 نگهداري نمائيد.

كنترل كيفي :

 ظاهر پودر: صورتی تا بنفش کمرنگ خشک و یکدست

 قدرت ژلاتینی: جامد، با 1.6% اگار

 رنگ و شفافیت: ارغوانی و شفاف

عامل كشت داده شده                      نتيجه رشد                        رنگ كلني

     1                                                   +              بنفش ،مركز تيره و جلاي فلزي

     2                                                   +                               بي رنگ

     3                                                   +                              بي رنگ

     4                                                  –                                   –

1-Escherichia coli  ATCC 25922

2-Salmonella typhimurium  ATCC 14028

3-Proteus mirabilis ATCC 25933

4-Staphylococcus aureus ATCC 25923