KIA (Kligler Iron Agar)                                                                             .

MK – 2101

اين محيط توسط (Kligler)  در سال  1917 براي  تشخيص باكتريهاي گرم منفي روده اي كه قادر به تخمير گلوكز و لاكتوز، تولیدH₂S  هستند ؛ پيشنهاد گرديد.

مواد تشكيل دهنده (گرم در ليتر):

Peptone ……………………………….…….20

Meat extract…..…………………..…………..3

Dextrose …………………………..…..…..…1

Lactose……………………………………….10

Sodium chloride………..……………..………5

Ferric citrate…………………..…………….0.5

Sodium thiosulphate…………….…….… 0. 5

Phenol red…………………………..…….0.05

Agar……………………………..……………15

pH : 7.4 ± 0.2 (at 25°C)

دستورالعمل :

5/55 گرم از پودر را به 1 ليتر آب مقطر يا ديونيزه اضافه نمائيد و آنرا بجوشانيد  تا كاملا حل گـردد .  سپس در دماي          ° C121 و فشار 15 پوند به مدت 15 دقيقه اتوكلاو نمائيد.

كليگلر آيرون آگار

اولين بار از اين محيط براي تشخيص باكتريهاي گرم منفي روده اي استفاده شد.لاكتوز و دکستروز،  كه تخمير اين دو قند باعث افتراق بین گونه ها می شود ناشی از تغییر رنگ فنل رد (اندیکاتورpH) می باشد.فروس سولفات و سدیم تیوسولفات تولید H₂Sسریع می کند که بصورت رسوب سیاه رنگ در سراسر Butt لوله دیده می شود.در اين محيط ميتوان توليد گاز را توسط باكتريها با شکافتن و جابجایی آگار  تشخیص داد. براي كشت باكتريهاي مورد آزمايش بايد از دو قسمت شيب دار لوله (بصورت زيگزاگ) و استوانه اي لوله (بصورت عمقي) استفاده نمود . در صورت تخمير هر دو قند pH محيط اسيدي و معرف فنل رد به رنگ زرد تبديل ميگردد و اگر باكتري فقط قادر به تخمير دکستروز باشد بعد از گذشت 3 ساعت قسمت شيب دار و استوانه اي زرد رنگ ميگردد ولي به علت مقدار كم دکستروز ( 1/0 دکستروز) و عدم توانائي در تخمير لاكتوز ؛ باكتري جهت ادامه حيات شروع به استفاده از پپتون مينمايد و محيط را مجددأ قليائي كرده و رنگ آن قرمز ميگردد . جهت انكوبه كردن ؛ محيط كشت داده شده را به مدت 24 تا 48 ســـــــاعت در دماي C °  37 قرار دهيد.

شرايط نگهداري:

در جاي خشك و دور از نور  مستقيم و در حرارت  °C15 تاC °25 نگهداري نمائيد. پس از استفاده درپوش را محكم ببنديد. محيط آماده را در دماي °C8-2 نگهداري نمائيد.

كنترل كيفي :

ظاهر پودر: نارنجی کمرنگ خشک و یکدست

قدرت ژلاتینی: جامد، با 1.5% آگار

رنگ و شفافیت: قرمز و شفاف

عامل كشت داده شده   نتيجه رشد Butt   Slant   H2S    Gas  

1               +            +                –    زرد   زرد

2                     +         –    +    قرمز زرد

3                   +         –    +        قرمز   زرد

4               +         –    –    قرمز قرمز

1-Escherichia coli  ATCC 25922

2-Salmonella typhimurium  ATCC 14028

3-Proteus mirabilis  ATCC 14153

4-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853